Núcleo de imágenes celulares y moleculares

La misión de la instalación central de imágenes celulares y moleculares (CMI) del centro COBRE de neurociencia integradora es proporcionar la infraestructura y los recursos necesarios para realizar imágenes celulares y moleculares de biomoléculas, así como la preparación de medios para futuras investigaciones en la Universidad de Nevada, Reno ( UNR). La instalación Core está ubicada en el tercer piso del edificio Fleischmann Lifesciences en el Departamento de Biología de la Facultad de Ciencias.

Las instalaciones de CMI Core brindan acceso a instrumentos de última generación, incluido un nuevo sistema de imágenes de dos fotones Scientifica HyperScope para escanear tejidos profundos en cerebros vivos y animales completos, un sistema de microscopio confocal Leica SP8 equipado con un RAYO que permite la captura de detalles celulares y observe la dinámica con una resolución de hasta 120 nm, un microscopio vertical Leica Thunder 3D Tissue, un microscopio estereoscópico Leica Thunder Model Organism diseñado para obtener imágenes de embriones, órganos y organismos pequeños como Drosophila y C. elegans, un GE Phosphoimager para transferencia Northern , un ChemiDoc de BioRad para transferencia Western, dos instrumentos de PCR en tiempo real de BioRad para PCR precisas y cuantitativas, un QIAgility para configuración de PCR automatizada, un espectrofotómetro GeneSys 180 UV/Vis y un fluorómetro Quibit 4.

Otras capacidades del núcleo incluyen instrumentos de preparación de medios y recursos para la cría de Drosophila y C. elegans utilizados como organismos modelo.

Ubicación: FA 318 (se requiere acceso con llave de puerta)

La microscopía de dos fotones se ha convertido en una herramienta indispensable para la neurociencia celular, que permite obtener imágenes fluorescentes de alta resolución de células in vitro e in vivo del cerebro vivo y de animales completos. El sistema HyperScope es un microscopio de dos fotones hecho a la medida, equipado con un láser de zafiro de Ti ampliamente sintonizable Mai-Tai eHPDS (690-1040 nm), múltiples objetivos (16x, 20x y 40x), y se encuentra sobre una placa de pruebas Thorlabs y mesa antivibraciones. Con la cámara CCD Scientifica SciCam Pro, es posible realizar imágenes funcionales de frecuencias de cuadros de video de 24 fps (resolución completa) y 40 fps (binted 2 x 2). El conjunto del detector incluye un PMT desplazado al rojo y un módulo GaAsP PMT, e imágenes de epifluorescencia con juegos de filtros para GFP (extinción 470/40x, emisión 525/50m) y mCherry (extinción 560/40x, emisión 630/75m). Los espejos de escaneo en la ruta de imágenes se pueden organizar en múltiples configuraciones según sus necesidades. Con hasta 3 espejos en serie, puede elegir entre arreglos galvo/galvo (GG), resonante/galvo (RG) o resonante/galvo/galvo (RGG). El microscopio está equipado con un eje Z ultrasuave para garantizar un movimiento sin vibraciones, y el eje Z se controla con software para adquirir pilas z con un tamaño de paso mínimo de 0,1 mm. La adición de un posicionador de objetivo piezoeléctrico del eje z permite imágenes de volumen de hasta 400 mm. El microscopio se puede configurar y cambiar fácilmente entre aplicaciones in vitro e in vivo quitando la óptica de la platina secundaria y el bloque vertical. El sistema está encerrado en una jaula opaca para evitar la contaminación lumínica y acústica de las muestras biológicas.

Esta plataforma incluye un galardonado software de adquisición Scientifica SciScan, que permite a los usuarios integrar SciScan fácilmente con aplicaciones personalizadas, como LabView y ScanImage. La interfaz del software ScanImage (Vidrio Technologies) utilizada por Scientifica fue desarrollada por el HHMI Janelia Farm específicamente para aplicaciones de neurociencia y se considera el software más avanzado del mercado para escaneo láser de dos fotones.

Las características únicas clave de Scientifica HyperScope incluyen:

Ubicación: FA 324

El Leica TCS SP8 LIGHTNING confocal permite la extracción de información de imagen con adquisición de súper resolución que explota la resolución lateral de subdifracción de la microscopía confocal. Permite capturar detalles celulares y observar la dinámica con una resolución de hasta 120 nm, que está cerca de las capacidades del microscopio de súper resolución STED. El confocal vertical es capaz de recolectar simultáneamente desde hasta 3 canales de detección (dos PMT, uno HyD) utilizando múltiples líneas láser (diodo 405, azul 488, verde 552, rojo 638 nm). El confocal está configurado con un escáner tándem convencional (8 kHz), una platina super Z-galvo tipo S, objetivos múltiples (10x, 20x, 25x, 40x, 63x) y se encuentra sobre una mesa antivibración. El confocal está conectado a una estación de trabajo de computadora equipada con el software Leica LAS-X y un monitor de 30 pulgadas.

Las características clave del confocal incluyen:

Ubicación: FA 324

Los generadores de imágenes THUNDER son una nueva clase de microscopios de campo amplio de alta resolución con limpieza computacional desarrollados exclusivamente por Leica Microsystems. Estos generadores de imágenes pueden adquirir datos nítidos e imágenes de alta calidad mediante la eliminación instantánea de la borrosidad o la neblina fuera de foco inherentes a las muestras gruesas en 3D que generalmente se adquieren mediante microscopía de campo amplio. Estos generadores de imágenes también acortan significativamente el flujo de trabajo de imágenes desde la adquisición de imágenes hasta el análisis de datos con el nuevo software de navegación LAS-X. El THUNDER Imager 3D Tissue es un microscopio vertical motorizado y está equipado con una cámara DFC 9000 GT/C ultrarrápida, y es ideal para cultivos celulares, tejidos, muestras fijadas y tejidos aclarados. El THUNDER Imager Model Organism es un microscopio estereoscópico M205 FCA diseñado para obtener imágenes de embriones, órganos completos y organismos pequeños.

Las características clave del generador de imágenes de tejidos THUNDER 3D incluyen:

Las características clave del generador de imágenes de organismos modelo THUNDER incluyen:

Ubicación: FA 312 (Sala de equipo/núcleo compartido, se requiere acceso con código de puerta)

El Typhoon Phosphoimager es un escáner láser rápido y versátil para mediciones sensibles y cuantitativas de muestras marcadas con radioisótropos. El Typhoon es un escáner láser de modo variable no confocal que ofrece alta velocidad y resolución para la cuantificación precisa de proteínas, ácidos nucleicos y otras biomoléculas. El escáner comprende autorradiografía "sin película" con pantallas de fósforo de almacenamiento. El láser puede generar imágenes de 16 bits con una resolución de píxeles de hasta 25 μm para brindar una cuantificación precisa en geles y transferencias, con una alta velocidad para escanear geles de hasta 240 x 250 mm en menos de 2 minutos. Dos pantallas de fósforo con un tamaño de 200 X 250 mm están disponibles para autorradiografía. El escáner puede detectar una amplia gama de isótopos en muestras radiomarcadas. Directamente adyacente al sistema fosfoimager, hay una computadora PC con un paquete de software que permite el análisis cuantitativo y cualitativo de imágenes y datos en el sitio.

Las características clave del generador de imágenes Typhoon incluyen:

Ubicación: FA 312 (Sala de equipo/núcleo compartido, se requiere acceso con código de puerta)

El Chemidoc de Biorad es un gel fácil y de alto rendimiento y captura de imágenes por transferencia para la cuantificación precisa de muestras de proteínas en geles y membranas. El Chemidoc agiliza la transferencia Western en un enfoque de cinco pasos mediante la combinación de técnicas tradicionales de transferencia con herramientas innovadoras para permitir una cuantificación de bandas mejorada y una evaluación rápida de los resultados de la electroforesis y la calidad de transferencia de la transferencia antes de la transferencia Western. El Chemidoc permite resultados rápidos de Western blot en tan solo 15 minutos con una transferencia de proteína eficiente en 3 minutos y una imagen de gel sin manchas de 5 minutos. El software integrado incluye todas las herramientas para el análisis cuantitativo y cualitativo de imágenes y datos. Las imágenes tomadas en el ChemiDoc también se pueden imprimir directamente.

Las características clave del sistema ChemiDoc incluyen:

Ubicación: FA 314 (instalación de cultivo de tejidos, se requiere acceso con código de puerta)

El sistema de transferencia Trans-Blot Turbo combina técnicas de transferencia tradicionales con papel de filtro moderno y tampones que permiten una transferencia rápida de proteínas de geles a membranas con un tiempo de preparación mínimo. El sistema integra una fuente de alimentación de alto amperaje que dirige la corriente entre un ánodo de titanio platinizado incorporado y un cátodo de acero inoxidable.

Las características clave del Turbo-Blotter incluyen:

Ubicación: FA 313 (Sala de autoclave)

El autoclave de medios Integra permite la preparación rápida y cuidadosa de 1 a 10 litros de medio de cultivo. El control preciso de temperatura, tiempo y presión durante el proceso de esterilización garantiza una alta calidad constante. El mediaclave se puede utilizar para la preparación y esterilización de numerosos tipos de medios de cultivo, incluidos los medios para la investigación de C. elegans. El amplio puerto de adición facilita la adición segura de suplementos antes de la dispensación. El mediaclave está conectado a una bomba peristáltica alojada en una estación de trabajo de flujo vertical para llenar placas de petri y viales.

Las características clave del Mediaclave incluyen:

Ubicación: FA 312 (Sala de equipo/núcleo compartido, se requiere acceso con código de puerta)

Dos máquinas de PCR en tiempo real de Biorad combinan tecnología óptica avanzada con control térmico preciso para brindar detección sensible y confiable, corridas de configuración rápida y monitoreo de trazas de amplificación en tiempo real en la pantalla táctil LCD integrada. Justo al lado de los dos sistemas de detección de qPCR, hay una computadora que contiene un software fácil de usar para el análisis in situ de los datos de qPCR.

Las características clave del CFX96 incluyen:

Ubicación: FA 312 (Sala de equipo/núcleo compartido, se requiere acceso con código de puerta)

El QIAgility es un instrumento de sobremesa compacto que permite una configuración rápida y de alta precisión de experimentos de PCR con software listo para usar para mayor facilidad y comodidad. El software proporciona una guía paso a paso para la configuración de la mesa de trabajo y el cálculo automático de todas las mezclas, lo que elimina la necesidad de programar los pasos de pipeteo. Simplemente seleccione el kit y la cicladora, defina sus objetivos y comience la carrera. Para mayor flexibilidad, el QIAgility se maneja a través de una computadora portátil.

Las características clave de QIAgility incluyen:

Ubicación: FA 312 (Sala de equipo/núcleo compartido, se requiere acceso con código de puerta)

El espectrofotómetro GeneSys realiza mediciones UV-Vis cuantitativas de alto rendimiento donde se requiere un haz doble como posición de celda de referencia. Optimizado para la usabilidad y el rendimiento, este sistema cuenta con una pantalla táctil a color de alta resolución y una red Wi-Fi opcional. El compartimiento es un cambiador de celdas de 8 posiciones (estándar).

Las características clave del GeneSys 180 UV/VIS incluyen:

Ubicación: FA 314 (instalación de cultivo de tejidos, se requiere acceso con código de puerta)

El fluorómetro Qubit 4 mide con precisión la cantidad de ADN, ARN y proteínas. El Qubit junto con un kit de ensayo RNA IQ puede distinguir con precisión el ARN intacto del degradado en solo dos sencillos pasos. Para todos los ensayos Qubit, la concentración o la calidad de la molécula objetivo en la muestra se informa mediante un tinte fluorescente que emite una señal solo cuando se une al objetivo, lo que minimiza los efectos de los contaminantes en el resultado. Los menús de pantalla táctil fáciles de usar facilitan la selección y ejecución de los ensayos que necesita, y los resultados se muestran en solo unos segundos.

Las características clave del fluorómetro Qubit 4 incluyen:

Un técnico de laboratorio/núcleo (tbd) en el personal brinda capacitación básica y soporte técnico para ayudar a los investigadores con todos nuestros equipos y software. Para obtener información sobre el núcleo, comuníquese con el director del núcleo, Alexander van der Linden, Ph.D. en [email protected].

Para imágenes confocales y de dos fotones:

Para imágenes moleculares y accesorios: